Lembram-se da ovelha Dolly?

Os cientistas levaram muitos anos, mas acabaram por conseguir criar o primeiro mamífero do mundo clonado a partir de uma célula somática adulta.

Felizmente, a clonagem de cogumelos não é assim tão complicada.

De facto, é algo que qualquer micólogo em início de carreira pode fazer facilmente em casa.

Porquê clonar cogumelos?

A clonagem de frutos silvestres permite-te copiar cogumelos da natureza e cultivá-los.

A clonagem permite copiar frutos que apresentam variações genéticas, de cor, de forma, etc. interessantes.

Também pode copiar cogumelos comprados em lojas ou cogumelos que tenha cultivado.

Há várias razões para querer clonar cogumelos.

Em primeiro lugar, a floresta é a fonte original de todas as estirpes de cogumelos comerciais. Agora, poder-se-ia tentar recolher esporos para propagar estes cogumelos selvagens - mas seria um risco, sem saber que tipo de genética se obteria.

A clonagem, por outro lado, permite-nos retirar novas estirpes de cogumelos da natureza, fazer facilmente cópias genéticas idênticas no laboratório Com a clonagem, tem mais hipóteses de obter uma estirpe prolífica. Se crescer no exterior, já estará geneticamente adaptada ao seu ambiente local.

A clonagem também nos permite copiar cogumelos com características interessantes e genéticas únicas - como frutos maiores, tempos de colonização mais rápidos ou toda uma série de outras características potencialmente valiosas - e capturar essas características para benefício futuro.

O processo de clonagem

O processo de clonagem de cogumelos é relativamente simples e basicamente o mesmo, quer se trate de clonagem de espécies selvagens, de espécies cultivadas ou mesmo de frutos comprados em lojas.

Tudo o que precisa de fazer é colher um pedaço de tecido do corpo de um cogumelo, colocá-lo em ágar e deixar o micélio crescer até obter uma cultura pura.

Fácil!

Esta estratégia funciona porque o corpo do cogumelo, mesmo depois de ser colhido, continua a ser uma manifestação viva e respiratória de micélio.

As células são ainda dispostos e capazes de se reproduzir.

Ao transferir o tecido vivo para um meio de ágar rico em nutrientes, as células podem entrar em ação, propagando o micélio através da placa.

Porque não começar com esporos?

Pode sempre procurar novas estirpes começando por esporos, em vez de criar um clone.

O problema é que os esporos são um tiro no escuro. Quando se despejam milhões de esporos numa placa de ágar, eles germinam e começam a desenvolver "hifas", filamentos unicelulares que contêm exatamente metade da informação genética necessária para formar um corpo de fruto.

Para formar micélio, é necessário que duas hifas se encontrem. Quando isso acontece, criam essencialmente uma nova estirpe - com um grande número de variações genéticas potenciais. Os resultados são muito imprevisíveis, razão pela qual os produtores comerciais começam a partir de cópias de estirpes comprovadas, em vez de esporos.

A clonagem é uma forma de garantir que a genética da sua cultura será a mesma que a genética do fruto do qual o clone foi retirado.

Dito isto, começar a partir de esporos tem as suas aplicações, mas não se estiver à procura de resultados previsíveis.

Colheita de tecido

O tecido pode ser retirado de qualquer parte do corpo do cogumelo, mas alguns dos melhores locais para colher células reprodutoras são topo da haste (que contém frequentemente restos de micélio), até às guelras debaixo da tampa, ou bem no meio do caule .

NOTA Não se recomenda a colheita de tecido de brânquias, principalmente porque será difícil garantir a limpeza e porque estará coberto de esporos de cogumelos - que podem germinar e criar uma nova estirpe diferente do teu clone.

Também é difícil garantir a limpeza se se retirar tecido do tronco, uma vez que este foi exposto a ambientes ricos em contaminantes.

Se possível, gosto de retirar tecido do interior do caule, porque é aí que se obtém a amostra mais limpa - embora o seu crescimento possa ser um pouco mais lento do que o das células que se reproduzem rapidamente diretamente sob as brânquias.

Clonagem em casa

Pode fazer clones facilmente em casa... por isso não tenha medo de experimentar.

Passo 1: Selecionar fruta e limpar

A primeira coisa a fazer é selecionar o fruto.

Tente encontrar um corpo de fruto relativamente grande, uma vez que os espécimes extremamente pequenos ou as espécies de polpa fina podem ser difíceis de obter amostras de tecido limpas.

Depois, é necessário limpar o exterior do corpo do fruto com um pano embebido em álcool, o que irá danificar o cogumelo e torná-lo impróprio para comer, pelo que terá de estar disposto a sacrificá-lo pelo clone.

A razão pela qual o fazemos é porque o exterior do corpo da fruta foi exposto ao ar e está, sem dúvida, coberto de todo o tipo de contaminantes - que podem facilmente encontrar o seu caminho para o prato. reduzir o potencial de contaminação .

Passo 2: Cortar a fruta ao meio

Uma vez limpo o corpo de frutificação, rasgue-o ao meio num ambiente estéril, de preferência em frente a uma campânula de fluxo, mas também pode ser feito numa SAB (caixa de ar parado).

Deve-se rasgar o fruto em vez de o cortar para evitar empurrar contaminantes do exterior do fruto para o centro do corpo do fruto. O interior do cogumelo será naturalmente estéril e conterá apenas células férteis do cogumelo.

Se utilizar uma campânula de fluxo, lembre-se de manter sempre o corpo do fruto a jusante da campânula de fluxo.

Etapa 3: Transferir o tecido

Tomar uma bisturi esterilizado por chama e retirar um pequeno pedaço de tecido do interior do corpo do fruto.

Normalmente gosto de esterilizar o bisturi com uma chama antes de Também se pode forçar o arrefecimento mergulhando-o na placa de ágar limpa antes da transferência.

De qualquer forma, o bisturi deve estar frio antes de entrar em contacto com o cogumelo Caso contrário, é provável que mate o tecido.

Existem muitos locais para remover o tecido, mas o mais fácil de trabalhar é a parte mais grossa e carnuda do cogumelo, que é normalmente o centro do caule ou o centro do chapéu, e que varia consoante a espécie.

Não se esqueça de que, basicamente, em qualquer sítio onde se recolha o tecido, este conterá células adequadas para a clonagem.

Remova o tecido raspando o bisturi ao longo do fruto algumas vezes. Também pode cortar um pequeno quadrado de 1/8", mas isso é normalmente mais complicado.

Trazer o tecido para montante e colocá-lo sobre a prato de ágar .

Este movimento deve ser suave e o mais rápido possível, minimizando o tempo em que a placa de ágar está aberta, especialmente se for utilizado um SAB.

Gosto de colocar pelo menos três pedaços de lenço de papel em forma de triângulo num único prato. Nem todos os lenços de papel descolam e alguns ficam contaminados, pelo que colocar vários pedaços de lenço de papel em cada prato será mais económico.

Passo 4: Limpar, colonizar e armazenar

Depois de as placas terem sido inoculadas e acondicionadas em parafilme Gosto também de colocar as placas num saco Ziploc para as manter livres de pó ou de outros contaminantes transportados pelo ar.

Observe atentamente as placas e, nos 2-3 dias seguintes, verá que o micélio começa a crescer radialmente a partir do tecido.

É possível obter uma cultura limpa à primeira tentativa, mas também há uma boa hipótese de a sua placa conter contaminação, especialmente se estiver a trabalhar com clones selvagens.

Se for esse o caso, basta efetuar transferências de culturas, removendo um pedaço de micélio limpo da placa contaminada para uma nova placa. Repetindo este processo algumas vezes, acabará por obter uma cultura limpa para trabalhar.

Claro que, se a placa estiver demasiado contaminada e não houver micélio limpo visível, talvez seja melhor deitá-la fora e tentar de novo.

Exemplos de clonagem

Cogumelos silvestres

Este é um dos melhores casos de utilização para a clonagem de cogumelos.

Uma das minhas coisas favoritas é encontrar cogumelos interessantes na floresta, trazê-los para o laboratório e tentar salvar a cultura através de um clone.

Esta é uma espécie de Trametes ( Trametes hirsuta Não tenho a certeza se vale a pena cultivar esta planta, mas não deixa de ser divertido ter uma cultura guardada para sempre.

Também clonei recentemente uma espécie de Agaricus ( Agaricus campestris ), o que deve ser um desafio divertido para tentar cultivar em casa.

É claro que, ao clonar cogumelos silvestres para fins de cultivo e consumo, é preciso ter a certeza absoluta de que se tem uma identificação positiva da espécie.

Cogumelos comprados em loja

Outro caso de utilização interessante para a clonagem é a criação de cópias de cogumelos comprados em lojas. É possível clonar cogumelos Shiitake, Button Mushrooms e até Ostras comprados em lojas.

Ao fazê-lo, tente obter os seus espécimes o mais frescos possível para aumentar as suas hipóteses de sucesso.

Aqui está um Shiitake que foi clonado a partir de um cogumelo comprado numa loja.

Salvar uma estirpe

Uma vez quase perdi uma estirpe de Ostra cor-de-rosa ( Plerotus djamor A maioria das estirpes de Pinks não sobrevive a temperaturas frias.

Felizmente, quando reparei que tudo o que estava no frigorífico tinha morrido, tinha por acaso um bloco de frutificação com frutos frescos de Ostra Rosa. Consegui tirar um clone dos frutos e salvar a estirpe. Caso contrário, teria desaparecido para sempre!

Clonagem de cogumelos

Quer se trate de capturar variedades selvagens da floresta ou de copiar a genética de cogumelos cultivados, a clonagem é uma competência valiosa para qualquer micólogo amador aprender.

Com pouco esforço, pode encontrar novas variedades para cultivo ou guardar cópias de frutos com características interessantes e valiosas.